By Lauren Alvarenga

如果您需要在不影響細胞活力的情況下獲得高品質的圖像，那麼活細胞螢光成像可能就很棘手。儘管如此，只要選用正確的顯微鏡工具和技術，您就可以成功進行實驗並獲得可靠的圖像資料。這裡介紹一下獲得良好活細胞螢光成像的六個技巧。

1.選用適合您成像需求的顯微鏡。

在涉及到活細胞成像的情況下，並非所有顯微鏡都沒有分別。比如說，倒置顯微鏡由於從樣品下方成像，因此活細胞成像效果很好。這樣可以讓物鏡能夠更靠近活體標本，而這對於大多數高數值孔徑（NA）物鏡來說是必需的要求。

2.使用蓋玻片底部培養皿。

塑膠底部培養皿會導致自發螢光並降低信噪比（S/N）。由於這些原因，在活細胞螢光成像實驗期間盡可能使用蓋玻片底部培養皿非常重要。

3.使用透射率較高的螢光濾光片提高信噪比。

螢光濾光片鏡組及其內部的濾光片是活細胞螢光成像實驗最重要的硬體之一。選用具有高透射率的濾光片就可以收集盡可能多的螢光信號。這樣可以縮短曝光時間，從而減少光漂白和光毒性。奧林巴斯濾光片鏡組包含的特殊塗層還可減少鏡組內的雜散光並提高最終成像的信噪比。

4.使用高數值孔徑物鏡收集更多光信號並縮短曝光時間。

使用具有較高數值孔徑的物鏡是縮短曝光時間的另一種好方法。在相同放大倍率下，這類物鏡將比較低數值孔徑物鏡收集更多的光信號。這將有助於進一步縮減曝光時間，從而在長時間活細胞螢光實驗中改善細胞健康狀況。

5.根據您的實驗需求優化培養模型。

當今市場上的顯微鏡培養箱種類繁多。無論使用載物臺上的培養箱還是全包裹顯微鏡的培養箱，務必確保培養箱能夠滿足活細胞的所有需求，包括提供濕度和適當氣體濃度的能力。某些培養箱甚至帶有可防止室內光線進入顯微鏡的遮光板，從而有助於提高信噪比。

6.使用鎖焦設備減少達到正確對焦位置所需的Z軸幀數。

由於活體樣本會四處移動，因此務必確保在延時實驗期間可以正確捕獲焦平面圖像。不要通過Z軸序列在每個時間點將樣品多次暴露在激發光照明下，而是要使用可在延時實驗中保持聚焦的漂移補償設備。