StayGold 持久不衰的生醫螢光
2024.02.02
分子螢光標示技術是現代生命科學研究中不可或缺的技術之一。已經開發出許多螢光蛋白技術的宮脇敦史團隊,克服螢光蛋白容易褪色的缺點,開發出持久發光的新型螢光蛋白「StayGold」。
持久螢光的挑戰
綠色螢光蛋白(Green Fluorescent Protein, GFP)來自維多利亞多管發光水母體內,當照射藍光(激發光)時,它吸收光能並發出綠色的螢光。通過標記GFP,可以即時視覺化細胞內的胞器(如囊泡)的形態和運動。
螢光蛋白內的發色團吸收激發光後,起初能發出明亮螢光,但會逐漸遭受光照破壞褪色,最終失去螢光活性,即為光漂白現象(photobleaching)。GFP等現有的螢光蛋白,都存在易褪色的缺點。當樣本受到強烈的激發光照射,將迅速出現大幅度褪色,限制了觀察的規模。
這個問題的解決之道,出現在水母Cytaeis uchidae體內。水母體內的天然綠色螢光蛋白CU17S,被宮脇團隊改造為變異體StayGold螢光蛋白。與現有的螢光蛋白相比,StayGold更明亮,且可以持續發光10至100倍長的時間(見圖1.)。
RIKEN 理化學研究所
腦神經科學研究中心 細胞功能探索技術研究團隊 首席研究員
光量子工程研究中心 生命光學技術研究團隊 首席研究員
研究團隊領導人宮脇敦史說:「我早就決定,若有一天以螢光蛋白克服光漂白問題,就會命名為『StayGold』。表示其明亮而持久的發光能力。」
宮脇團隊將StayGold和現有的綠色螢光蛋白(EGFP、SiriusGFP、mClover3、mNeonGreen)表現在細胞中,連續照射強烈的藍光,並記錄各種螢光蛋白分子每秒發射光子的數量(從1000個光子起),繪製螢光強度衰減圖。StayGold在實驗中表現出明顯較高的光穩定性(photostability, 光照下不易褪色的能力)。
提升超解析觀察的時空規格
通常而言,使用超解析光學顯微鏡需要強烈的激發光,長時間觀察可能導致光漂白現象,但使用StayGold可以實現長時間的連續超解析觀察。宮脇團隊以134幀/秒的高速超解析顯微攝影,成功觀察了整個細胞內質網系統,並持續了6分鐘(見圖2.)。
挑戰數億年的演化
宮脇敦史將研發StayGold視為一種與自然演化的競爭:「我們在試管內改造螢光蛋白,是在挑戰珊瑚和水母等生物數億年的進化成果。」
目前,StayGold存在二聚體干擾觀察的問題。螢光蛋白二聚體會影響分子標記的定位清晰程度。為了增進其可靠度與精準度,宮脇團隊正在積極開發單體形式的StayGold蛋白。